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常用卵白表达系统——优弱点、应用领域

2015-07-30
|
会见量:

卵白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因卵白的一种分子生物学手艺。。。。

表达系统优点弱点应用领域
大肠杆菌表达系统
Escherichia coli
表达水平高;;;;;;
低本钱;;;;;;
简朴的作育条件;;;;;;
生产迅速;;;;;;
可拓展性强;;;;;;
转化操作简朴;;;;;;
卵白表达可以通过多个参数举行优化;;;;;;
容易形成二硫键
卵白折叠性较差(包括细菌卵白);;;;;;
易形成容纳体;;;;;;
低效的体外折叠可能抵消优势;;;;;;
与真核生物差别密码子系统;;;;;;
很少的翻译后修饰;;;;;;
内毒素
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明);;;;;;
药物卵白生产
毕赤酵母表达系统
Pichia pastoris
表达水平高;;;;;;
低本钱;;;;;;
简朴的作育条件;;;;;;
生产迅速;;;;;;
可拓展性强;;;;;;
渗透卵白或细胞内表达的优异选择;;;;;;
卵白渗透高效且允许简朴纯化;;;;;;
普遍的翻译后修饰;;;;;;
N-端糖基化能力优于酿酒酵母;;;;;;
无内毒素
使用甲醇作为诱导剂具有一定危害;;;;;;
糖基化仍然差别于哺乳动物细胞
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明)
酿酒酵母表达系统
Saccharaomyces cerevisiae
表达水平较高;;;;;;
渗透卵白或细胞表达的优异选择;;;;;;
低本钱;;;;;;
简朴的作育条件;;;;;;
可拓展性强;;;;;;
拥有大大都真核生物的翻译后修饰;;;;;;
有用的卵白折叠;;;;;;
无内毒素;;;;;;
比毕赤酵母的表达水平低;;;;;;
渗透能力可能低于毕赤酵母;;;;;;
糖基化与哺乳动物细胞差别;;;;;;
过糖基化;;;;;;
N-端糖基链结构具有致敏性
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明);;;;;;
药物卵白生产
哺乳动物细胞表达系统较高的表达水平;;;;;;
中度的可扩展性;;;;;;
细胞的悬浮作育特征可大规模生产;;;;;;
有用的卵白折叠;;;;;;
适合渗透卵白;;;;;;
充分的翻译后修饰;;;;;;
无内毒素
作育基腾贵;;;;;;
重大的生长条件
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明);;;;;;
药物卵白生产;;;;;;
基于细胞的研究
杆状病毒浸染后的昆虫细胞
( 杆状病毒-昆虫细胞表达系统)
表达水平高(特殊是细胞内卵白);;;;;;
较快的生长速率;;;;;;
有用的细胞折叠;;;;;;
中度可扩展性;;;;;;
普遍的翻译后修饰;;;;;;
糖基化与哺乳动物细胞类似;;;;;;
相对容易地酶促的去糖基化(关于卵白结构测定有利);;;;;;
无内毒素
作育基腾贵;;;;;;
需要大宗的病毒;;;;;;
亲肽的渗透通路低效;;;;;;
糖基化仍然差别于哺乳动物细胞;;;;;;
病毒侵染会导致细胞裂解和潜在的表达卵白降解
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明)
瞬时表达系统卵白的快速生产通道转染试剂腾贵;;;;;;
需要大宗质粒DNA
稳固细胞系可获得卵白生产细胞株系生产速率缓慢(需要数月),, ,,,,,特殊是使用选择性克隆的情形下传代历程中表达能力可能下降
无细胞卵白生产卵白的快速生产通道;;;;;;
大肠杆菌,, ,,,,,小麦胚芽,, ,,,,,昆虫和哺乳动物系统均市售;;;;;;
生产量的可控;;;;;;
卵白合成条件可控;;;;;;
可容易地吸收非氨基酸组分;;;;;;
可使用PCR产品作为模版,, ,,,,,适合于简朴的高通量要领;;;;;;
在没有犬科胰岛素的情形下有限的翻译后修饰
量化生产本钱腾贵纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明);;;;;;
体外表达克。。。;;;;;;
同位素标记过的核磁共振卵白;;;;;;
吸收非自然氨基酸组分
BacMam-介导的瞬时转导卵白的快速生产通道;;;;;;
可扩展性强;;;;;;
无需纯化所需的大宗质粒DNA;;;;;;
非裂解(拜见杆状病毒/昆虫细胞)
许多人体细胞的高效转导;;;;;;
病毒需求量大


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