CA88药理学效劳为您提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验，，，，详情可联系获得。。。。。。邮箱：marketing@medicilon.com.cn 电话：021 58591500。。。。。。

裸鼠效劳流程

    1、操作计划设计
2、要领开发
3、细胞制备
4、裸鼠成瘤

裸鼠皮下成瘤动物实验要领 

分组:SW620细胞组、SW620转染无关siRNA组、SW620转染目的基因（每组6只）。。。。。。 
细胞准备及注射裸鼠要领： 到动物室准备实验。。。。。。 

取出未作处置惩罚的小鼠和处置惩罚后小鼠用鼠笼，，，，顺序摆放在超净台中。。。。。。选体形较大的小鼠称重，，，，以3μl/g剂量，，，，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠。。。。。。约5分钟，，，，小鼠最先进入清静状态，，，，将其仰卧牢靠。。。。。。切忌镇痛剂过量使用。。。。。。 

(1)铺白布于鼠板上，，，，仰卧位牢靠小鼠四爪，，，，碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线。。。。。。消毒两次。。。。。。铺手术巾于小鼠上，，，，在其左侧剪口（4*4cm），，，，袒露其左侧腹部, 用碘伏消毒一次。。。。。。在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤，，，，袒露腹壁肌肉，，，，镊子牵拉腹壁肌肉，，，，避开腹腔内脾脏，，，，剪开腹壁肌肉，，，，袒露内脏。。。。。。用棉签蘸PBS，，，，拨出脾脏下极，，，，切忌牵拉，，，，以免损伤脾脏和胰腺。。。。。。 
(2)找到脾脏同时，，，，用25微升Matrigel混淆于细胞管中，，，，打悬细胞沉淀，，，，使细胞疏散匀称成单细胞悬液。。。。。。用BD针吸净EP管中的单细胞悬液，，，，稍退针芯，，，，打出气泡，，，，在脾脏下极内侧（凹面）进针向脾门偏向约2mm最先注射细胞，，，，注射完毕停留约30秒钟，，，，缓慢退出针，，，，以防细胞渗透。。。。。。同时用蘸PBS的棉球榨取周围出血点止血。。。。。。 
(3)用注射器吸收庆大霉素注射液（专心理盐水250：1稀释）约400微升，，，，注入腹腔，，，，棉球蘸干皮缘渗透的抗生素。。。。。。？
？Ｗ钕确旌细贡诩∪猓ㄒ涣旌4针）。。。。。。再次用注射器吸收庆大霉素注射液约400微升冲洗缝合口，，，，棉球蘸干。。。。。。缝合皮肤（中止缝合4针）。。。。。。碘伏棉球消毒缝合口。。。。。。吊销牢靠，，，，使小鼠处于自然体位，，，，放于鼠笼中。。。。。。 
(4)所有细胞注射完毕，，，，剪耳标记，，，，纪录剪耳标记及分组情形。。。。。。 
Day5-7：注重小鼠的状态，，，，实时发明小鼠是否有因手术刺激、胰腺损伤、熏染等殒命的情形。。。。。。 
Day42：颈椎离断，，，，正法小鼠，，，，剖解遗体，，，，视察脾脏肿瘤生长状态，，，，肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成。。。。。。所有可疑组织均做好标记，，，，照相，，，，若有外貌结节，，，，计数后，，，，冻于液氮中。。。。。。视效果情形用10%甲醛溶液牢靠住宿后做病理。。。。。。 

裸鼠皮下成瘤实验技巧

1、细胞状态是成瘤实验的要害，，，，以是细胞生长状态一定要好，，，，取处于对数生恒久的细胞，，，，细胞达80-90%左右密度为宜;网络细胞前一天晚上替换新鲜作育基。。。。。。
2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，，，，目的为去除细胞中的血清。。。。。。
3、用PBS或者无血清作育基奏乐细胞沉淀至合适的浓度，，，，一样平常皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，，，，接种体积为0.1ml，，，，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml。。。。。。
4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，，，，一样平常只管在半小时内完成，，，，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。。。。。。
5、选择的裸鼠一样平常在5-8周龄，，，，体重18-20g左右，，，，莳植部位选择血供富厚区域，，，，如腋窝中后部、腹股沟中上部。。。。。。
6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，，，，避免细胞成团而降低细胞成活率。。。。。。
7、接种时，，，，针头在皮下进针深一点，，，，约1cm深，，，，镌汰注射后细胞悬液从针眼溢出。。。。。。
8、怎样抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，，，，小拇指夹住裸鼠尾巴。。。。。。

9、接种后一周左右可以见到皮下最先泛起肿块。。。。。。
10、凭证肿瘤细胞的特征和接种细胞的量，，，，一样平常皮下成瘤的周期为1-2个月。。。。。。肿瘤不宜生长过大，，，，一样平常不要凌驾1000mm3 ，，，，肿瘤负荷过大常；；；；；；嵋晕シ炊锫桌矶辉又旧绲竽(由于这个问题凄凉地被plos one拒过稿）。。。。。。
11、肿瘤巨细丈量一样平常为1周两次，，，，游标卡尺丈量肿瘤最长和最短部位。。。。。。V=1/2*a*b2 (a为长轴，，，，b为短轴)。。。。。。
12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提卵白和RNA，，，，一部分福尔马林牢靠用做免疫组化、免疫荧光等。。。。。。

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